{"id":2565,"date":"2020-05-04T01:58:04","date_gmt":"2020-05-04T00:58:04","guid":{"rendered":"http:\/\/oxfordbrazilebm.com\/?page_id=2565"},"modified":"2020-05-04T01:58:04","modified_gmt":"2020-05-04T00:58:04","slug":"que-testes-podem-ser-potencialmente-utilizados-para-o-rastreio-diagnostico-e-monitorizacao-da-covid-19-e-quais-sao-as-suas-vantagens-e-desvantagens","status":"publish","type":"page","link":"https:\/\/oxfordbrazilebm.com\/index.php\/que-testes-podem-ser-potencialmente-utilizados-para-o-rastreio-diagnostico-e-monitorizacao-da-covid-19-e-quais-sao-as-suas-vantagens-e-desvantagens\/","title":{"rendered":"Que testes podem ser potencialmente utilizados para o rastreio, diagn\u00f3stico e monitoriza\u00e7\u00e3o da COVID-19 e quais s\u00e3o as suas vantagens e desvantagens?"},"content":{"rendered":"

[vc_row][vc_column][vc_column_text]Tradutores:\u00a0Paulo Nadanovsky, Rachel Riera<\/p>\n

\n

 <\/p>\n

Kile Green1<\/sup>, Amanda Winter2<\/sup>, Rachel Dickinson2<\/sup>, Sara Graziadio2<\/sup>,\u00a0Robert Wolff3<\/sup>, Susan Mallett4<\/sup>, A. Joy Allen1<\/sup><\/p>\n

1<\/sup>NIHR Newcastle In Vitro Diagnostics Co-operative
\nUniversidade de Newcastle, Newcastle upon Tyne, NE2 4HH
\n2<\/sup>NIHR Newcastle In Vitro Diagnostics Co-operative
\nNewcastle upon Tyne NHS Hospitals Foundation Trust, Newcastle upon Tyne, NE1 4LP
\n3<\/sup>Kleijnen Systematic Reviews Ltd
\nUnit 6, Escrick Business Park, York, YO19 6FD
\n4<\/sup>Instituto de Pesquisa Aplicada \u00e0 Sa\u00fade
\nUniversidade de Birmingham B15 2TT<\/p>\n

PDF para download<\/a><\/p>\n

\u00a0<\/strong><\/p>\n

PARECER<\/strong><\/p>\n

Muitos testes diagn\u00f3sticos para a doen\u00e7a do coronav\u00edrus 2019 (COVID-19) est\u00e3o dispon\u00edveis at\u00e9 o momento, com mais testes recebendo aprova\u00e7\u00e3o emergencial a cada dia. Os testes s\u00e3o baseados em quatro t\u00e9cnicas diferentes: (1) rea\u00e7\u00e3o em cadeia da polimerase via transcriptase reversa (RT-PCR) – o teste padr\u00e3o atual para COVID-19; (2) amplifica\u00e7\u00e3o isot\u00e9rmica mediada por loop (LAMP) – um m\u00e9todo de testagem simples, mas menos desenvolvido; (3) fluxo lateral – teste port\u00e1til de uso \u00fanico que fornece resultado em at\u00e9 15 minutos; e (4) ensaio de imunoabsor\u00e7\u00e3o enzim\u00e1tica (ELISA) – teste r\u00e1pido e tecnicamente simples, de f\u00e1cil leitura e rendimento relativamente alto.<\/p>\n

\u00a0<\/strong><\/p>\n

CONTEXTO<\/strong><\/p>\n

Uma s\u00e9rie de t\u00e9cnicas moleculares incluindo testagem em laborat\u00f3rio central ou no pr\u00f3prio local de atendimento (point-of-care<\/em>) est\u00e3o em desenvolvimento ou j\u00e1 dispon\u00edveis para o diagn\u00f3stico e manejo de pacientes com COVID-19. Estas t\u00e9cnicas, embora conhecidas por pesquisadores e cl\u00ednicos com forma\u00e7\u00e3o em amplifica\u00e7\u00e3o de \u00e1cido desoxirribonucleico (DNA), bem como em ensaios de anticorpos e ant\u00edgenos, podem ser relativamente desconhecidas para a comunidade em geral. Este documento foi escrito para resumir e explicar os princ\u00edpios b\u00e1sicos dos principais testes diagn\u00f3sticos da COVID-19 atualmente em uso ou em fase de pesquisa.<\/p>\n

\u00a0<\/strong><\/p>\n

GLOSS\u00c1RIO<\/strong><\/p>\n

Os termos-chave utilizados neste documento (destacados em negrito) s\u00e3o descritos aqui:<\/p>\n

Anticorpos<\/strong> – Anticorpos s\u00e3o prote\u00ednas protetoras produzidas naturalmente em resposta \u00e0 notifica\u00e7\u00e3o da presen\u00e7a de estruturas estranhas (ant\u00edgenos), por exemplo, durante uma infec\u00e7\u00e3o viral. O corpo produz anticorpos precoces ‘prot\u00f3tipos’ (IgM) com for\u00e7a intermedi\u00e1ria para se ligarem ao v\u00edrus. Eles s\u00e3o capazes de come\u00e7ar a trabalhar para eliminar o v\u00edrus cerca de cinco dias ap\u00f3s o in\u00edcio da infec\u00e7\u00e3o. Normalmente, oito a dez dias ap\u00f3s o in\u00edcio da infec\u00e7\u00e3o, os anticorpos IgG, que possuem alta for\u00e7a de liga\u00e7\u00e3o ao v\u00edrus, podem funcionar para ajudar na elimina\u00e7\u00e3o mais r\u00e1pida do v\u00edrus. Os anticorpos atuam desenvolvendo uma superf\u00edcie de contorno compat\u00edvel para aderir aos ant\u00edgenos, usando um sofisticado processo de sele\u00e7\u00e3o que amplifica aqueles anticorpos com melhor compatibilidade de superf\u00edcie e maior for\u00e7a de liga\u00e7\u00e3o.<\/p>\n

Ant\u00edgeno<\/strong> – Um ant\u00edgeno \u00e9 uma estrutura reconhecida como estranha pelo corpo humano que aciona o sistema imunol\u00f3gico para produzir sistemas de autodefesa e eliminar pat\u00f3genos do sangue e tecidos. A elimina\u00e7\u00e3o de ant\u00edgenos \u00e9 liderada por anticorpos e gl\u00f3bulos brancos.<\/p>\n

COVID-19 – Doen\u00e7a do coronav\u00edrus-19<\/strong> – Uma doen\u00e7a respirat\u00f3ria causada pelo coronav\u00edrus 2 da s\u00edndrome respirat\u00f3ria aguda grave (SARS-CoV-2), coloquialmente referido como coronav\u00edrus. A fam\u00edlia dos coronav\u00edrus inclui n\u00e3o apenas o SARS (-1 e -2) e MERS, mas tamb\u00e9m formas mais brandas(causadoras de 15-20% dos resfriados comuns).<\/p>\n

DNA – \u00c1cido desoxirribonucleico<\/strong> – A mol\u00e9cula que o ser humano, e a maioria dos organismos, utiliza para armazenar o seu c\u00f3digo gen\u00e9tico. O DNA cont\u00e9m a informa\u00e7\u00e3o que as c\u00e9lulas usam para fazer prote\u00ednas. \u00c9 formado a partir de dois filamentos que se unem formando um estrutura em forma de h\u00e9lice.<\/p>\n

Enzima –<\/strong> Uma enzima \u00e9 uma prote\u00edna que acelera as rea\u00e7\u00f5es qu\u00edmicas por meio da adapta\u00e7\u00e3o ou altera\u00e7\u00e3o de outras prote\u00ednas e mol\u00e9culas.<\/p>\n

Fluoresc\u00eancia <\/strong>– Esta \u00e9 a luz emitida por certas mol\u00e9culas quando elas absorvem energia.<\/p>\n

Imunidade de rebanho<\/strong> – Este m\u00e9todo de prote\u00e7\u00e3o contra a propaga\u00e7\u00e3o de doen\u00e7as proporciona imunidade populacional por meio da vacina\u00e7\u00e3o de uma grande porcentagem da popula\u00e7\u00e3o, protegendo assim aqueles que n\u00e3o s\u00e3o imunes pela redu\u00e7\u00e3o das suas chances de exposi\u00e7\u00e3o \u00e0 doen\u00e7a.<\/p>\n

RNA – \u00c1cido Ribonucleico<\/strong> – Em humanos, o RNA tem muitas fun\u00e7\u00f5es, mas uma das principais \u00e9 copiar sequ\u00eancias do DNA para fazer prote\u00ednas. Alguns v\u00edrus utilizam o RNA ao inv\u00e9s do DNA para armazenar seu c\u00f3digo gen\u00e9tico, incluindo o v\u00edrus que causa a COVID-19.<\/p>\n

Sensibilidade <\/strong>– A capacidade de um teste diagn\u00f3stico ter um resultado positivo quando se espera que seja positivo.<\/p>\n

Soro<\/strong> – O soro \u00e9 um l\u00edquido amarelado que faz parte do sangue. \u00c9 o componente l\u00edquido do sangue uma vez removidas as c\u00e9lulas sangu\u00edneas.<\/p>\n

Especificidade<\/strong> – A capacidade de um teste diagn\u00f3stico ter um resultado negativo quando se espera que seja negativo.<\/p>\n

Swab<\/strong> – Um pequeno peda\u00e7o de gaze ou outro material absorvente preso a uma haste utilizado para a coleta de amostras de pacientes. Tanto os swabs longos como os curtos s\u00e3o utilizados em testes de coronav\u00edrus. Os swabs longos s\u00e3o utilizados por um cl\u00ednico para a coleta de esfrega\u00e7os nasais, mas os curtos podem ser utilizados pelos pr\u00f3prios pacientes. Diferentes protocolos podem requerer diferentes tipos de swab.<\/p>\n

Rea\u00e7\u00e3o em Cadeia da Polimerase via Transcriptase Reversa (RT-PCR)<\/strong><\/p>\n

\u00a0<\/em><\/p>\n

Vis\u00e3o geral da tecnologia<\/em><\/p>\n

PCR \u00e9 uma t\u00e9cnica cient\u00edfica muito comum que tem sido amplamente utilizada em pesquisa e medicina por cerca de 20 a 30 anos para detectar informa\u00e7\u00f5es gen\u00e9ticas. RT-PCR \u00e9 uma vers\u00e3o especial usada para detectar o RNA<\/strong> e agora est\u00e1 sendo usada como teste para detectar o SARS-CoV-2, o v\u00edrus causador da COVID-19<\/strong>. Este tipo de teste tem sido frequentemente utilizado como teste de linha de frente para a COVID-19<\/strong>, pois testa diretamente a presen\u00e7a do RNA<\/strong> do v\u00edrus.<\/p>\n

Os testes de RT-PCR s\u00e3o bastante r\u00e1pidos, sens\u00edveis <\/strong>e confi\u00e1veis, capazes de gerar resultados em 3 a 4 horas, embora isso normalmente leve mais tempo se as amostras tiverem que ser enviadas primeiramente para laborat\u00f3rios externos especializados (6 a 8 horas, em m\u00e9dia).<\/p>\n

Muitas empresas de diagn\u00f3stico e pesquisa fabricam produtos, testes e aparelhos de RT-PCR, portanto, a tecnologia est\u00e1 amplamente dispon\u00edvel. Alguns testes de RT-PCR s\u00e3o desenvolvidos como um kit “tudo-em-um”, reduzindo o manuseio do laborat\u00f3rio e o potencial de contamina\u00e7\u00e3o.<\/p>\n

\u00a0<\/em><\/strong><\/p>\n

Como ela funciona<\/em><\/strong><\/p>\n

Uma vez coletada uma amostra, s\u00e3o utilizados produtos qu\u00edmicos para remover quaisquer prote\u00ednas, gorduras e outras mol\u00e9culas, deixando apenas RNA<\/strong> para tr\u00e1s. Isto ser\u00e1 uma mistura do material gen\u00e9tico de uma pessoa, bem como qualquer RNA<\/strong> viral que possa estar presente.<\/p>\n

As enzimas<\/strong> do kit do teste copiam o RNA<\/strong> para o DNA<\/strong>, que \u00e9 amplificado para permitir a detec\u00e7\u00e3o de v\u00edrus usando uma m\u00e1quina de PCR que faz o ciclo de temperatura do teste para que cerca de 35 bilh\u00f5es de c\u00f3pias de DNA<\/strong> viral sejam feitas para cada filamento de RNA<\/strong> viral que estava originalmente presente.<\/p>\n

\u00a0<\/strong><\/p>\n

Marcadores fluorescentes<\/strong> s\u00e3o normalmente usados para se ligar ao DNA<\/strong> amplificado e produzir luz, que pode ser lida pela m\u00e1quina para produzir o resultado do teste. Se a intensidade da luz produzida dentro da amostra atingir um determinado limiar, este \u00e9 classificado como um teste positivo. O n\u00famero de ciclos de temperatura de PCR que foram necess\u00e1rios antes que o limiar de fluoresc\u00eancia<\/strong> fosse atingido \u00e9 registrado e d\u00e1 uma estimativa da quantidade de v\u00edrus que estava presente na amostra do paciente.<\/p>\n

\"\"<\/p>\n

    \n
  1. O DNA viral \u00e9 aquecido at\u00e9 95\u00baC, separando os seus dois filamentos.<\/li>\n
  2. A rea\u00e7\u00e3o \u00e9 resfriada at\u00e9 55\u00baC, o que faz com que os filamentos separados se liguem a filamentos de DNA pequenos e complentares e tamb\u00e9m a marcadores fluorescentes.<\/li>\n
  3. Aquecendo a rea\u00e7\u00e3o at\u00e9 73\u00baC permite que os novos filamentos de DNA se liguem e se expandam, produzindo 2x a quantidade de DNA em compara\u00e7\u00e3o com a quantidade produzida no passo 1.<\/li>\n
  4. Os ciclos de aquecimento e resfriamento (passos 1-3) s\u00e3o repetidos aproximadamente 30 vezes, e a cada vez a quantidade de DNA viral formado dobra. Isto pode ent\u00e3o ser detectado pela m\u00e1quina.<\/li>\n<\/ol>\n

    O que o teste detecta?<\/em><\/strong><\/p>\n

    O RT-PCR detecta se o RNA<\/strong> viral est\u00e1 ou n\u00e3o presente em amostras de um paciente. Ele faz isso capturando e amplificando regi\u00f5es do material gen\u00e9tico do v\u00edrus, geralmente a prote\u00edna Spike, a prote\u00edna N ou o Envelope (veja a figura).<\/p>\n

    Para medir o RNA<\/strong> viral, ele \u00e9 convertido em DNA<\/strong>, copiado muitas vezes usando ciclos repetidos de temperatura em uma m\u00e1quina de PCR e depois s\u00e3o usados marcadores fluorescentes<\/strong> para detectar o v\u00edrus. Se a quantidade de fluoresc\u00eancia<\/strong> ultrapassar um certo n\u00edvel, isto confirma que o v\u00edrus est\u00e1 presente. O n\u00famero de ciclos de temperatura que a m\u00e1quina realiza para atingir este limiar \u00e9 registrado para estimar a quantidade de v\u00edrus presente na amostra do paciente. Quanto menor o n\u00famero de ciclos, mais v\u00edrus estava presente. Geralmente estas amostras s\u00e3o retiradas do nariz ou da garganta usando swabs<\/strong> longos ou curtos, mas as amostras tamb\u00e9m podem ser coletadas de outras formas. A coleta de amostras de onde o v\u00edrus est\u00e1 se espalhando ou se multiplicando melhora a acur\u00e1cia do teste.<\/p>\n

    \"\"<\/p>\n

    Diagrama do vir\u00fas extra\u00eddo de:<\/p>\n

    https:\/\/www.scientificanimations.com\/coronavirus-symptoms-and-prevention-explained-through-medical-animation\/<\/a><\/p>\n

    O que significa o resultado?<\/em><\/strong><\/p>\n

    Um teste RT-PCR \u00e9 altamente sens\u00edvel <\/strong>e bastante confi\u00e1vel se realizado em uma amostra de uma parte infectada do corpo enquanto uma infec\u00e7\u00e3o ativa est\u00e1 ocorrendo.<\/p>\n

    Resultado do teste positivo: – Um resultado positivo de PCR significa que a pessoa da qual a amostra foi retirada est\u00e1 atualmente infectada pelo v\u00edrus.<\/p>\n

    Resultado do teste negativo: – Um resultado negativo de PCR pode significar que a pessoa n\u00e3o est\u00e1 atualmente infectada por este v\u00edrus, o v\u00edrus n\u00e3o est\u00e1 presente no local de onde a amostra foi retirada, a amostra retirada foi de qualidade ruim, ou que a infec\u00e7\u00e3o est\u00e1 em um est\u00e1gio muito precoce, ou muito tardio, para detectar a replica\u00e7\u00e3o do v\u00edrus. \u00c9 por isso que resultados negativos de testes exigem que novas amostras de pacientes sejam coletadas alguns dias depois para reduzir a chance de, incorretamente, deixar de identificar uma pessoa infectada.<\/p>\n

    O teste RT-PCR n\u00e3o pode detectar se uma pessoa teve o v\u00edrus e ent\u00e3o o eliminou ap\u00f3s o fim da doen\u00e7a COVID-19<\/strong>, ou seja, se uma pessoa teve a doen\u00e7a, pois ele s\u00f3 detecta quando o v\u00edrus ativo est\u00e1 presente.<\/p>\n

    \u00a0<\/em><\/strong><\/p>\n

    Vantagens e limita\u00e7\u00f5es<\/em><\/strong><\/p>\n

    \u00a0<\/em><\/strong><\/p>\n

    Vantagens:<\/em><\/p>\n